X'inhu Peptide Synthesis

 

Is-sintesi tal-peptidi hija qasam attiv fil-kimika tal-proteini u tal-peptidi, li tipikament tinvolvi ż-żieda sekwenzjali ta 'aċidi amminiċi f'ordni definit biex tifforma l-katina tal-peptidi b'metodi kimiċi. Il-metodi ta 'sinteżi ewlenin huma sinteżi ta' fażi likwida u solida. Meta mqabbel ma 'LPPS, SPPS għandu l-vantaġġi li jkun aktar mgħaġġel, aktar sempliċi, b'inqas reazzjonijiet sekondarji, u rendimenti ogħla.

 

Metodu standard SPPS, inklużi strateġiji Boc (benzyl ) u Fmoc (tBu ).

 

 

Strateġija Boc (benżil).

F'dan l-approċċ ta 'sinteżi, reżini tal-polistirene chloromethylated, hydroxymethylated u p-methoxybenzyl (PMA) jintużaw bħala appoġġi solidi. Il-grupp -amino huwa protett b't-butoxicarbonyl (Boc), filwaqt li gruppi tal-katina tal-ġenb ta 'aċidi amminiċi huma protetti b'derivattivi tal-benżil. Il-grupp Boc jitneħħa bl-użu ta 'TFA pulita jew TFA f'CH2Cl2, u fl-aħħar tas-sinteżi, gruppi ta' protezzjoni tal-katina tal-ġenb u rabtiet peptide-reżina jitneħħew b'aċidu qawwi bħal aċidu idrofluworiku anidru (HF) jew TFMSA.

 

Fmoc (tBu ) strateġija

F'dan l-approċċ ta' sinteżi, Wang-resin, 2-Chlorotrityl Chloride Resin, Rink amide-AM Resin, Rink amide-MBHA reżini jintużaw bħala appoġġi solidi. Il-grupp -amino huwa protett bi 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc ), filwaqt li l-gruppi tal-katina tal-ġenb ta 'aċidi amminiċi huma protetti bi gruppi li jipproteġu l-aċidu. Il-grupp Fmoc jitneħħa bl-użu ta' 20% piperidine f'DMF, u fl-aħħar tas-sintesi, il-gruppi li jipproteġu l-katina tal-ġenb u l-konnessjonijiet peptide-reżina jitneħħew b'1%-95% TFA. Fmoc SPPS bħalissa huwa l-metodu preferut għas-sintesi tal-peptidi.

 

Prinċipji Bażiċi ta 'Fmoc Solid-phase Peptide Synthesis

 

Agħżel Reżina

Ir-reżini l-aktar applikati f'Fmoc SPPS inkluż 4-reżina tal-alkoħol Alkoxybenzyl (Wang), 2-reżina tal-klorur tal-Klorotritil, Raża Rink Amide, reżini Rink Amide-MBHA. Ir-reżini tal-amide jintużaw għal peptidi ta 'sinteżi b'amidazzjoni terminali C meħtieġa. Ir-reżina Wang u r-reżina 2-Cl Trt jintużaw b'mod komuni għal peptide ta' sinteżi b'COOH ħieles tat-terminal C meħtieġ. Iżda meta t-terminal C tal-peptide għandu Pro u Gly bħala l-ewwel aċidu amminiku, ir-reżina Wang m'għandhiex tintuża minħabba r-riskju ta 'formazzjoni ta' DKP (diketopiperazine), 2-Chlorotrityl Chloride Resin hija rakkomandata għall-użu.

 

 

It-twaħħil ta' aċidi amminiċi protetti mar-Reżini

L-ewwel aċidu amminiku Fmoc huwa mwaħħal ma 'reżina ta' appoġġ li ma tinħallx permezz ta 'linker labile ta' l-aċidu.

 

Deprotezzjoni tal-grupp li jipproteġi -amino

Il-grupp li jipproteġi Fmoc temporanju fit-tarf N tal-peptidyl-resin jitneħħa billi jiġi ttrattat b'soluzzjoni ta '20% piperidine f'DMF. Din ir-reazzjoni normalment tispiċċa fi żmien 10 sa 20 minuta.

 

Passi tal-ħasil

Wara kull reazzjoni kimika, isiru passi tal-ħasil biex jitneħħew ir-reaġenti żejda, il-prodotti sekondarji, u l-molekuli li ma rreaġixxewx mir-reżina. Dan jgħin biex tinżamm il-purità tal-katina tal-peptidi li qed tikber.

 

Attivazzjoni u igganċjar tal-aċidu amminiku protett

L-aċidu amminiku protett marbut mar-reżina huwa attivat biex itejjeb ir-reattività tiegħu għall-akkoppjar mal-aċidu amminiku li jmiss fis-sekwenza. Aġenti attivanti komuni jinkludu HOAt, HOBt, PyBOP, PyAOP, HBTU u HATU. L-akkoppjar jinvolvi l-iffurmar ta 'rabta peptide bejn l-aċidu amminiku attivat u l-grupp amminiku tal-katina tal-peptidi li qed tikber. Test Kaiser huwa tipikament użat biex jimmonitorja l-kompletezza tar-reazzjonijiet tal-akkoppjar.

 

Passi tal-ħasil

Simili għall-passi tal-ħasil preċedenti, dan jiżgura t-tneħħija ta 'reaġenti żejda u prodotti sekondarji wara r-reazzjoni tal-akkoppjar.

 

Il-qsim mir-reżina u t-tneħħija tal-protezzjoni tal-gruppi li jipproteġu l-katina tal-ġenb

Ladarba s-sekwenza tal-peptide mixtieqa tiġi sintetizzata fuq ir-reżina, hija tinqasam mis-sostenn solidu bl-użu ta 'cocktail ta' qsim bħal aċidu trifluoroacetic (TFA) li fih kenniesi bħal thioanisole u ilma. Fl-istess ħin, il-gruppi li jipproteġu l-katina tal-ġenb fuq ir-residwi tal-aċidu amminiku jitneħħew, li jiżvelaw il-peptide kompletament deprotett lest għall-purifikazzjoni u l-analiżi.